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研究红托竹荪对小鼠免疫功能的影响[科学实验]

作者 :叶建方,刘泳庭,郑 发布时间 : 2019-03-16 20:20:16

 

竹荪是竹荪属(DictyophoraDesv)的统称,具有丰富的营养价值和药用价值,其含有的多种活性成份如多糖、氨基酸、维生素、黄酮等,在抗衰老、抗氧化、抑菌、降血脂、抗肿瘤、免疫调节等方面具有良好的药用价值。

红托竹荪(Dictyophorarubrovalvata)是竹荪中的珍品,于1976被命名,主要分布于云贵高原。从香菇多糖应用于临床抗肿瘤开始,真菌的功能研究越来越受到研究者的关注。本研究以环磷酰胺制备免疫功能低下小鼠模型,通过观察小鼠血清中白细胞介素-12(interleukin-12,IL-12)、interleukin-4(IL-4)和y-干扰素(Y-interferon,IFN-y)表达水平变化,探讨红托竹荪的免疫保护作用,为其保健功能的开发提供理论依据。结果报告如下。

竹荪

目的:探讨红托竹荪对小鼠免疫功能的影响。

方法:用不同浓度红托竹荪按0.02mL/g对小鼠连续灌胃30d,在第20天开始对环磷酰胶组:红托竹荪低、中、高剂量组(5、10、15gkg)小鼠腹腔注射50mgkg环磷酰胶,连续3d,同时各剂量红托竹荪组继续进行红托竹荪茬胃。禁食24h后称重,小鼠眼球取血,分离脾脏和胸腺。测定小鼠血清中白细胞介素-12(IL-12)、IL-4和y-干扰索(IFN-y)水平。

结果:与对照组比较,环磷酰胺组小鼠体重、脾脏指数、胸腺指数无明显变化;与环磷酰胺组比较,高剂量红托竹荪组小鼠体重、脾脏指数、胸腺指数明显升高(P<0.05)。与对照组比较,环磷跣胺组小鼠血清中IL-12、IL-4和IFN-y含量[分别为(18.12+3.55)、(10.19+2.29)、(12.73+2.79)]均明显下降,差异有统计学意义(P<0.05);与环磷酰胺组比较,中、高剂量红托竹荪组小鼠血清中IL-12、IL-4和IFN-y含量[分别为(32.58+3.95).(17.81+4.23).(22.58+3.76)和(31.73+4.30).(23.50=1.66)、(25.27+3.86)]均增高,差异有统计学意义(P<0.05)。

结论:红托竹荪可以促进IL-12、IL-4和IFN-y表达,对环磷酰胺诱导的小鼠免疫功能损伤具有一定保护作用。

实验小白鼠

1.材料与方法

1.1 实验动物 昆明种雌性小鼠40只,体重18~22g,由贵州医科大学实验动物中心提供,实验动物生产许可证号码:ScXK(黔)2012-0001,实验动物使用许可证号码:SYXK(黔)2014-001。温度:18~24℃、湿度:40%-70%。

1.2 主要试剂与仪器 红托竹荪(贵州四盛商贸有限责任公司),将红托竹荪干品置于80℃烤箱中烘干、粉碎,用4目筛过筛,称100g,加2000mL蒸馏水小火煮2h,同法提取2次,过滤,合并提取液并浓缩,调整体积至134mL(0.75g/mL),4℃保存备用。环磷酰胺(上海华联制药有限公司);IL-12、IL-4、IFN-y酶联免疫吸附实验(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)试剂盒(南京建成生物工程研究所);uQuant,Max200超级酶标仪(美国Bio-Tck公司)。

 1.3 分组与处理 40只小鼠适应性喂养1周,按体重随机分为对照组、环磷酰胺组、红托竹荪低、中、高剂量组(5、10、15g/kg),每组8只。对照组和环磷酰胺组小鼠给予蒸馏水,红托竹荪低、中、高剂量组分别给予5、10、15g/kg红托竹荪水提液,按每天0.02mL/g连续灌胃30d。在第20天时,环磷酰胺组、各剂量红托竹荪组小鼠分别腹腔注射环磷酰胺50mg/kg,连续3d,同时红托竹荪组继续进行红托竹荪灌胃。小鼠处死前24h禁食不禁水,称重,眼球取血后脊髓脱臼处死小鼠,解剖,脾脏和胸腺称重;以3000r/min离心10min,分离血清,-20℃保存待测。

红托竹荪

 1.4 指标与方法

 1.4.1 脏器指数测定 分离脾脏和胸腺,置于滤纸上吸干水分并称重,以脾脏、胸腺(mg)与体重(g)的比值表示小鼠脾脏、胸腺指数。

 1.4.2 IL-12、IL-4和IFN-y含量测定 用包被缓冲液将已知相应一抗稀释至10ug/mL,每孔加0.1mL,4℃过夜;次日洗涤3次;加待检血样0.1mL于上述已包被之反应孔中,同时做空白、阴性及阳性孔对照于反应孔中,37℃孵育1h;洗涤,加入新鲜稀释的相对应生物素标记的二抗体0.1mL.37℃孵育30~60min,洗涤;各反应孔中加入临时配制的3,3',5,5'-四甲基联苯胺(3,3',5,5'-tetramethyl-benzidine,TMB)底物溶液0.1mL,37℃10~30min显色;各反应孔中加入2mol/L硫酸0.05mL终止反应;于450nm处,以空白对照孔调零后测各孔吸光度(A)值。

 1.5 统计分析 用Excel2007对数据进录入整理,数据采用士x±s表示,用SPSS19.0软件进行统计分析,组间比较采用方差分析,方差不齐用Dunnett'sT3检验,以P<0.05为差异有统计学意义。

 2.实验结果

2.1 红托竹荪对小鼠脾脏、胸腺指数影响(表1)

 与对照组比较,环磷酰胺组小鼠体重、脾脏指数、胸腺指数无明显变化;与环磷酰胺组比较,高剂量红托竹荪组小鼠体重、脾脏指数、胸腺指数均增高,表1红托竹荪对小鼠体重、脾脏、胸腺指数影响(F土8,m=8)

红托竹荪对小鼠体重、脾脏、胸腺指数影响

差异均有统计学意义(P<0.05);

 2.2 红托竹荪对小鼠血清IL-12、IL-4和IFN-y表达影响(表2) 与对照组比较,环磷酰胺组小鼠血清中IL-12、IL-4和IFN-y含量均降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与环磷酰胺组比较,中、高剂量红托竹荪组小鼠血清中IL-12、IL-4和IFN-y含量均升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。

红托竹荪对小鼠血清IL-12、IL-4和IFN-y表达影响(表2) 与对照组比较

3.讨论

 环磷酰胺是一种强免疫抑制剂,对体液免疫和细胞免疫均有抑制作用间。本研究以环磷酰胺作为免疫抑制模型的制备药物,成功制备了免疫抑制动物模型。脾脏和胸腺是重要的免疫器官,在机体免疫防御中发挥重要作用。检测脾脏器官指数变化可间接反应机体免疫功能的状态[7。脾脏指数和胸腺指数在一定程度上可以反映机体的免疫功能状态,间接评价机体免疫水平。本研究结果显示,与环磷酰胺组比较,高剂量红托竹荪组小鼠脾脏指数和胸腺指数明显增加。提示,红托竹荪具有增强小鼠免疫功能的作用。

 研究发现,真菌多糖能够活化巨噬细胞、T、B淋巴细胞、自然杀伤细胞(NK细胞)和其他效应细胞,诱导肿瘤坏死因子-a(tumornecrosisfactor-a.TNF-a)、TNF-B、IFN-y、一氧化氮(nitricoxide,NO)和IL-1等细胞因子的分泌;同时也能激活补体系统,形成天然和获得性免疫应答。辅助性T淋巴细胞(Th细胞)是CD*+T细胞,根据分泌细胞因子的不同,分为Th1和Th2细胞。Th0细胞是Th细胞的共同前提,在受到刺激时转化为Thl细胞和Th2细胞[10]。Th1细胞可促进细胞免疫,Th2细胞可促进体液免疫。Thl和Th2淋巴细胞亚群比例在机体维持动态平衡。在受到刺激时,T细胞诱导抗原提呈细胞(APC)产生IL-12,而IL-12诱导IFN-y产生并促进Th1分化,同时,IL-12也可通过NK细胞诱导产生IFN-y[。IL-12对免疫细胞活性的调节具有作用强、范围广,在抗肿瘤研究中显示出良好的应用前景,可作为评价中药成分免疫增强作用的指标。

食用竹荪可增强免疫力

 IL-4是Th2细胞的特征性细胞因子,是Th2细胞应答强度的重要衡量指标。IFN-y是Th1细胞分泌的特征性细胞因子,具有促进Th1细胞分化.上调Th1型免疫反应。因此,IL-4和IFN-y含量可问接反映Th1和Th2细胞功能,从而反映机体体液免疫和细胞免疫的状态。当机体健康时,IL-4和IFN-y处于动态平衡;当机体处于疾病状态时,这一平衡遭到破坏。本研究结果显示,与环磷酰胺组比较,各剂量红托竹荪组小鼠血清中IL-12、IL-4和IFN-y含量均增加,IL-12表达增加促进了IL-4和IFN-y的表达。提示,红托竹荪可维持小鼠体内IL-4和IFN-y的平衡,从而对环磷酰胺诱导的免疫抑制具有一定保护作用。

 

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